전체 글 (4) 썸네일형 리스트형 DNA/RNA Purification 아마 유전자 시험을 한다면 가장 기본이 되는 시험이 아닐까 싶다. 앞서 설명한 PCR과 같은 실험을 하던 Cloning을 진행하던 어떠한 이유에서든 실험을 좀 더 매끄럽게 진행시키고, 신뢰도 있는 결과를 얻기 위한 하나의 과정이다. 대부분의 논문에서는 아마 주요한 시험 이전에 중간에 들어가는 과정과 같은 시험이기에 논문에도 이 부분에 대해서 잘 나오지도 않고 설명도 잘 없다. 그래서 이 부분에 대해서 한번 짚고 가보자. 그렇다면 시작해볼까. 첫번째로 DNA purification을 하기 전 어디서부터 DNA를 분리해야 하는지를 알 필요가 있다. 아마도 크게 세가지로 나눌 수 있을 것이다. 1. 조직, 혹은 세포 등에서 genomic DNA Purification 2. E.coli 등으로부터 Plasmid.. Primer Design 방법 자 이제 PCR에서 가장 중요한 Primer 그리고 Probe를 Design 해 보도록 하자. 우선 Primer 및 Probe 를 짜기 위한 몃가지 조건이 있다. 이하 조건을 최대한 만족시켜서 우리가 원하는 결과를 얻을 수 있도록 하자. 1) 길이 : 17-25mer 길이가 너무 짧으면 non-specific binding 확률이 올라간다. 반대로 너무 길면 binding 이 잘 이루어지지 않을 수 있다. 2) GC contents : 40-60% 너무 낮으면 primer 와 DNA 간 결합력이 약해 non-specific binding 이 늘 수 있다. 반대로 너무 높으면 DNA와 binding 에너지가 강해져서 Tm 값이 높아지거나 PCR이 잘 안될 수 있다. 3) Tm: 55-65℃ Tm은 Anne.. qPCR 시험법 1. 개요 qPCR은 quantitative Polymerase chain reaction의 약자로, PCR로 얻는 DNA를 정량하는 방법이다. PCR 과 비교하자면, PCR은 유전자에서 우리가 원하는 Target gene의 유무를 확인하고 복제하는 방법이라면, qPCR은 유전자에서의 Target gene 이 어느정도 발현하는지를 정량화 하는 방법이다. 우선 qPCR에는 크게 두가지 방법이 있다. 1)SYBR geen 을 이용한 Detection 2) Probe를 이용한 detection 두 방법에 대해 순서대로 이해해보자. 1) SYBR geen 을 이용한 Detection SYBR green에 대해 우선 알아볼 필요가 있다. SYBR green 은 dye 중 한 종류로 DNA 사이에 끼어드는 특징을 .. PCR 시험법 1. 개요 PCR 은 Polymerase Chain Reaction 의 약자로 한국말로 길게 풀어쓰자면 중합효소연쇄반응 이라고 한다. 간단히 말해서 Polymerase 를 이용하여 원하는 유전자를 복제시키는 기능이라고 생각하면 된다. 이러한 복제 기능을 이용하여, 원하는 DNA를 대량으로 얻기도 하고, 유전자 발현 유무를 확인하기도 한다. 범죄현장에서 머리카락 하나로 범인을 잡고 하는것도 이런 PCR 방법을 이용했다고 볼 수 있다. 유전자실험뿐만이 아니고 생물 혹은 관련 분야에 대해 공부하거나 종사한다면 누구나 알수밖에 없고, 알아야 하는 실험법이다. PCR 에 대한 필요한 핵심 정보들과 실험하면서 쉽게 실수할 수 있는 것들에 대해 정리하면서 실무적인 업무를 하는 사람들에게 조금이라도 도움이 되었으면 하.. 이전 1 다음
